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脂多糖提取試劑盒使用中的常見問題問答

2014-12-17  閱讀(723)

脂多糖提取試劑盒(LPS Extracton Kit) 

貨號(hào):17141

名稱:LPS Extraction Kit 脂多糖提取試劑盒

產(chǎn)地:韓國iNtRON

規(guī)格:100T

LPS背景描述:

 脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分,結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性*(在250℃下干熱滅菌2h才*滅活)。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因,如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素(endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成,不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓?,決定細(xì)菌的血清型;而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng),包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。臨床常通過檢測(cè)LPS的存在來診斷腦膜炎。

正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系,生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究,如闡明LPS的結(jié)構(gòu),代謝,免疫學(xué),生理學(xué),毒性,生物合成途徑;誘導(dǎo)生長促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌;誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng),急性肺損傷,

技術(shù)參數(shù):

從不同的細(xì)菌中提取脂多糖的量,如下表所示:

 

 

 利用脂多糖提取試劑盒從不同的OD600nm的革蘭氏陰性菌中提取LPS,并采用Purpal Assay 定量分析LPS提取量,提取效率列于上表中。同時(shí)利用SMARTTM Micro BAS 分析試劑盒分析蛋白的含量,結(jié)果顯示蛋白質(zhì)的含量低于0.2微克。

試劑盒使用中常見問題問答:

Q:我打算提取脂多糖,但是我們的離心機(jī)針對(duì)15ml的離心管zui大的轉(zhuǎn)速是10,000rpm。但按照說明書中描述,需要13,000rpm離心10分鐘。想請(qǐng)問我采用10,000rpm下離心30分鐘能達(dá)到同樣的效果嗎?

A:可以的,您可以在10,000rpm下離心20-30分鐘,但是我們建議為了達(dá)到的效果采用13,000rpm離心10分鐘。

 

Q:我想要提取脂多糖,我能先使用試用裝嗎?

A:脂多糖提取試劑盒是基于酚-水提取法研發(fā)的,因此是使用效果好且操作簡(jiǎn)單,我們沒有提供試用裝。

 

Q:我想在植物中通過分離多糖來核對(duì)其免疫活性,我想知道多糖中是否含有脂多糖。

A:在植物中沒有脂多糖。脂多糖存在于細(xì)菌中二各種糖類是存在于植物中。如果您想確認(rèn)提取的LPS,可使用銀染法。換句話說,在您使用LPS提取試劑盒提取LPS后,您可以利用銀染法簡(jiǎn)單地分析LPS的帶形。

 

Q:我一直在使用LPS提取試劑盒,但是產(chǎn)物中還存在少量蛋白。

A:存在較多的蛋白質(zhì)意味著上樣量太大了,為了得到更好的效果使用建議的樣品用量,如果提取的LPS中存在蛋白,建議使用蛋白酶k來去除。

 

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