071409Rb，血紅蛋白（HB）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
[預(yù)期應(yīng)用]
本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA法定量測定血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清 或其它相關(guān)生物液體中待檢測指標(biāo)含量。
[試劑盒內(nèi)容]
| 試劑名稱 | 數(shù)量 | 試劑名稱 | 數(shù)量 |
| 96孔板（預(yù)包被） | 1 | 96孔板覆膜 | 4 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品（液體） | 2 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1×20mL |
| 檢測溶液A（綠色） | 1×120μL | 檢測稀釋液A（2×） | 1×6mL |
| 檢測溶液B（紅色） | 1×120μL | 檢測稀釋液B（2×） | 1×6mL |
| TMB底物 | 1×9mL | 終止液 | 1×6mL |
| 濃洗滌液（30×） | 1×20mL | 使用說明書 | 1 |
[標(biāo)本的采集與保存]
1、 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4oC過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨?/span>置于-20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.02mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL預(yù)冷PBS進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘，留取上清即可檢測。
4、 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意：
1、 以上標(biāo)本均需密封保存，4oC保存應(yīng)小于1周，-20oC不應(yīng)超過1個(gè)月，-80oC不應(yīng)超過2個(gè)月。
2、 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
3、 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。[實(shí)驗(yàn)原理]
將待檢測抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的待檢測指標(biāo)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的待檢測抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待檢測指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。
[實(shí)驗(yàn)流程]
1、實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2、加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100μL，37oC孵育2小時(shí)；
3、加檢測溶液A100μL，37oC孵育1小時(shí)；
4、洗板3次；
5、加檢測溶液B100μL，37oC孵育30分鐘；
6、洗板5次；
7、加TMB底物90μL，37oC孵育15－25分鐘；
8、加終止液50μL，立即450nm讀數(shù)。
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