大鼠核因子κB抑制蛋白α（IKBα）ELISA測定試劑盒

規(guī)格：48T/96T定量定性檢測
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大鼠核因子κB抑制蛋白α（IKBα）ELISA測定試劑盒 組成及試劑配制
1.  酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2.  標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為1,600 pg/ml，將其稀釋為400 pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別稀釋成400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3.  樣品稀釋液：1×20ml。
4.  檢測稀釋液A：1×10ml。
5.  檢測稀釋液B：1×10ml。
6.  檢測溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（100μl/孔），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
7.  檢測溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8.  底物溶液：1×10ml/瓶。
9.  濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5張
12. 使用說明書：1份

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 酶標(biāo)儀判讀結(jié)果
◎顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色（30分鐘內(nèi)）。
       常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者zui為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm；
     TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm，
        二種底物的校正波長均用630nm。
        使用雙波長的優(yōu)點可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。
報告方式
◎定性試驗 國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計算，一律按S/C.O方式報告，S為標(biāo)本A值，C.O即Cut Off值（陽性判定值）
◎夾心法和間接法以S/C.O≥1為陽性；
     竟?fàn)幏ㄅc中和法以S/C.O﹤1為陽性
◎Cut Off的計算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：
◎A）  C.O=2.1×N（當(dāng)N不足0.05時按0.05計），
◎此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。
◎B） C.O=0.5×N，從抑止率公式換算而來，
◎常用于竟?fàn)?，中和?br />◎C） C.O=N+C（C為常數(shù)），用于間接法。
◎D）    C.O=C×P+N（C為常數(shù)），用于間接法。此公式zui客觀，但對生產(chǎn)廠家要求很高，陰陽性對照測定值要基本恒定。
報告方式
定量分析  用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋，ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。
ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。
◎現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實屬不易。
因此嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。

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