概述
氟喹諾酮檢測試劑盒適用于檢測氟喹諾酮的含量。這個檢測適用于定量或定性檢測水樣或魚蝦產(chǎn)品。其他樣品的提取步驟請與我公司。如果有必要可以通過HPLC, GC/MS或其他的傳統(tǒng)方法證實測定結(jié)果。
儲存和穩(wěn)定性
氟喹諾酮檢測試劑盒應(yīng)該保存在4–8°C。在使用之前試劑盒中的試劑要恢復(fù)到室溫。試劑盒在有效期內(nèi)可以使用。結(jié)合物以低壓凍干的形式保存（3瓶）。在檢測前要用結(jié)合物稀釋液配制一定量低壓凍干形式保存的結(jié)合物。因為配制好的溶液僅能保存1周所以需要多少就配制多少。
原理
Abraxis氟喹諾酮檢測試劑盒的原理是直接競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)。通過特異性抗體來識別氟喹諾酮。樣品中氟喹諾酮和氟喹諾酮-HRP酶結(jié)合物競爭與溶液中兔抗氟喹諾酮抗體結(jié)合位點結(jié)合。這氟喹諾酮抗體與固定在微孔板上的二抗結(jié)合。洗板，加入底物顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)；樣品中的氟喹諾酮濃度與顯現(xiàn)出的藍(lán)色的深度成反比。加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在450nm波長進行檢測，通過做標(biāo)準(zhǔn)曲線計算每個樣品中氟喹諾酮的含量。
A 試劑盒組成
1、96孔酶標(biāo)板：包被有羊抗兔二抗，1塊（12條×8孔）。
2、氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)品:7瓶，濃度分別為0, 0.025, 0.05, 0.125, 0.25, 0.5, 和1.0 ng/mL
3、氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物（結(jié)合物）：3瓶（低壓凍干保存），溶解后每瓶3ml
4、結(jié)合物稀釋液12 mL：用于稀釋氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物
5、兔抗氟喹諾酮抗體：1瓶（6ml）
6、樣品稀釋液25ml，用于稀釋樣品。
7、5×濃縮洗液：1瓶（100ml）
8、底物顯色液（TMB）：1瓶（12ml）
9、終止液：1瓶（12ml）。
檢測步驟
使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達(dá)到室溫。從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
1、在對應(yīng)的微孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)和樣品（或樣品提取液）。*做2-3個平行。
2、用多道移液器在每個測試孔都加入50 μL重新稀釋的氟喹諾酮HRP酶標(biāo)記物（結(jié)合物）。
3、用多道移液器在每個測試孔都加入50 μL兔抗氟喹諾酮抗體溶液，用膠帶蓋上，通過移動酶標(biāo)板來混合液體。
4、在室溫下孵育60分鐘
5、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。
6、每個測試孔加入100μL底物顯色液。通過移動酶標(biāo)板來混合液體，混合30秒。在室溫下孵育20-30min，避免陽光直射。
7、每個測試孔加入100μL終止液。
8、在加入終止液15分鐘內(nèi)，450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。
結(jié)果分析
可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來評價ELISA結(jié)果。也可以通過計算每個標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、氟喹諾酮濃度為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算。當(dāng)樣品中氟喹諾酮的濃度大于1ng/ml時要稀釋后再測定。
