前天不是給你了一瓶嗎？

師兄，那、那一瓶被我給養(yǎng)壞了。

沒(méi)關(guān)系，今天就給你介紹一下Vero細(xì)胞怎么養(yǎng)。

首先你要知道Vero細(xì)胞是什么。

Vero細(xì)胞全名叫非洲綠猴腎細(xì)胞，是從健康的成年非洲綠猴腎組織分離培養(yǎng)得到的。一說(shuō)起Vero細(xì)胞，肯定就是要和病毒以及疫苗聯(lián)系起來(lái)。因?yàn)椴《疽呙绲幕A(chǔ)是細(xì)胞培養(yǎng)、收獲足夠量的病毒，那么Vero細(xì)胞就是在培養(yǎng)病毒時(shí)所需的一種細(xì)胞基質(zhì)。

正因?yàn)槿绱?，Vero細(xì)胞是目前疫苗生產(chǎn)使用最多的一種傳代細(xì)胞，目前已經(jīng)廣泛用于乙腦疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗、輪狀病毒疫苗、黃熱病毒疫苗、甲肝疫苗、人用狂犬病疫苗等疫苗的生產(chǎn)。對(duì)于這個(gè)研究大方向的童鞋們來(lái)說(shuō)，養(yǎng)好Vero細(xì)胞就應(yīng)該是的技術(shù)基礎(chǔ)了。

那么，如何養(yǎng)Vero細(xì)胞，我認(rèn)為培養(yǎng)基的配方就是養(yǎng)好Vero細(xì)胞的準(zhǔn)則。

培養(yǎng)Vero細(xì)胞的培養(yǎng)基配方是：85%MEM+10%胎牛血清+2%+2%+1%的雙抗。當(dāng)然有些實(shí)驗(yàn)室建議如果是用胎牛血清的話，可以不用10%這么高的濃度，但是，憑經(jīng)驗(yàn)看，確實(shí)養(yǎng)得好的細(xì)胞都是通過(guò)好的培養(yǎng)基“金貴”出來(lái)的，如果細(xì)胞狀態(tài)足夠好，后面是可以將血清濃度降下來(lái)，這個(gè)對(duì)于細(xì)胞影響不是太大。

如果有純的MEM，就盡量用這個(gè)，不要輕易嘗試一些比如MEM-ALPHA什么的培養(yǎng)基，原因就兩個(gè)字“麻煩”。如果本身細(xì)胞狀態(tài)就不夠好，你又通過(guò)更換培養(yǎng)基濃度或是種類來(lái)折騰細(xì)胞，那就得不償失了。那么養(yǎng)好Vero細(xì)胞的第二準(zhǔn)則是什么呢？是消化。

我們知道對(duì)于貼壁細(xì)胞而言，消化是非常重要的一個(gè)步驟。我們用消化Vero細(xì)胞的時(shí)候有兩個(gè)小tips。

其一用PBS洗細(xì)胞三次以后，將加入培養(yǎng)瓶，10秒左右去掉，放入37℃培養(yǎng)箱消化，每隔10秒左右輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，直到觀察到有流沙狀細(xì)胞滑動(dòng)。

其二是用PBS洗細(xì)胞三次以后，將加入培養(yǎng)瓶，一分鐘以后倒置，將有細(xì)胞的面朝上，然后輕輕拍打，使細(xì)胞脫落。這兩個(gè)小tips都很適用的，因?yàn)橄鄬?duì)于拍打和37℃消化而言，消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，后者引起的細(xì)胞傷害更嚴(yán)重。

當(dāng)然除此之外，養(yǎng)Vero細(xì)胞和普通細(xì)胞一樣：要注意無(wú)菌操作、不要看細(xì)胞太勤、注意輕拿輕放、傳一瓶拿一瓶、讓細(xì)胞盡可能多的享受自己的生活環(huán)境。做到這些，你的細(xì)胞養(yǎng)不好都難。

哇！師兄，聽(tīng)你這么一講，我豁然開(kāi)朗！

對(duì)呀，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室往往都有一套做這個(gè)東西的方法~ 另外，說(shuō)起制備疫苗還要介紹一下我們用到的設(shè)備之一——高壓均質(zhì)機(jī)。

高壓均質(zhì)機(jī)有什么用途呢？

剛剛說(shuō)到Vero細(xì)胞是目前疫苗生產(chǎn)使用最多的一種傳代細(xì)胞，在生產(chǎn)乙腦疫苗、流感疫苗、脊灰疫苗等的一個(gè)中間環(huán)節(jié)就是細(xì)胞破碎，釋放出抗原?？瓤瓤龋煤诎謇?！我們的ATS均質(zhì)機(jī)就是做vero細(xì)胞、大腸桿菌、酵母菌等細(xì)胞破碎的機(jī)器~ATS均質(zhì)機(jī)細(xì)胞破碎率在95%上，對(duì)于相關(guān)參數(shù)可以直接放大用于中試和生產(chǎn)。

那高壓均質(zhì)機(jī)的破碎原理是什么？

在電機(jī)的驅(qū)動(dòng)下，均質(zhì)機(jī)上一個(gè)或數(shù)個(gè)柱塞做往復(fù)運(yùn)動(dòng)，物料在柱塞的作用下進(jìn)入壓力大小可調(diào)節(jié)的閥組中，在高壓的作用下，物料經(jīng)過(guò)特定寬度的限流縫隙（工作區(qū)）后，瞬間失壓的物料以的流速（1000-1500米/秒）噴出，碰撞在均質(zhì)閥組件之一的沖擊環(huán)上，產(chǎn)生三種效應(yīng)： 空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)，經(jīng)過(guò)這三種效應(yīng)處理過(guò)后，物料粒徑可達(dá)100nm以下，從而達(dá)到破碎細(xì)胞的作用。

那其實(shí)這三種效應(yīng)起到主要作用的就是空穴效應(yīng)啦？

對(duì)的，所以高壓對(duì)均質(zhì)機(jī)的性能是一個(gè)考驗(yàn)，而咱們的ATS均質(zhì)機(jī)工作壓力加到1800bar都是妥妥滴。想了解更多關(guān)于ATS均質(zhì)機(jī)可以咨詢德泉的產(chǎn)品經(jīng)理錢(qián)暢：！