一、細胞簡介：
細胞名稱：人肝癌細胞氟尿嘧啶耐藥株
平臺編號:zl-057120
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息:Bel/Fu
該細胞為氟尿嘧啶處理的人肝癌耐藥細胞株。
細胞特性
1）來源：肝癌細胞
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x106個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
注意：客戶收到細胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細胞長到70-80%的匯合度時，去掉培養(yǎng)液，加入含8000ng/mlFU藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含藥培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高15000ng/ml，含藥培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng)都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022，添加NaHCO31.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸鈉0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%，添加1%雙抗，20000ng/ml氟尿嘧啶。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
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質(zhì)粒載體產(chǎn)品：
提供各種類型載體宿主，基因種屬類型，抗性，設(shè)計并構(gòu)建質(zhì)粒：大腸桿菌表達載體；哺乳動物表達載體；酵母表達載體；昆蟲表達載體；植物表達載體；廣;腺病毒載體...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24
pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9
pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
質(zhì)粒菌種產(chǎn)品：
E.coliNissle1917；USA300：大腸桿菌JM108；希瓦氏菌屬MR-1；E.coliW3110野生型；釀酒酵母W303a；釀酒酵母invsc1；釀酒酵母BY4741；釀酒酵母BY4742；畢赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢桿菌WB800；根癌農(nóng)桿菌EHA105；根癌農(nóng)桿菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐藥鮑曼不動桿菌；哈維弧菌BB170
菌種產(chǎn)品：
提供模式菌種，科研菌種，普通菌種等菌種資源，有證質(zhì)控樣品等微生物標準品，芽孢懸液。常用藥典菌種如：大腸埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501,銅綠假單胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：長雙歧桿菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus），類干酪乳桿菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；靈芝，香菇，茯苓等
原代細胞和細胞系產(chǎn)品：
現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分：不同來源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細胞有：氣管上皮細胞；前列腺上皮細胞；膀胱上皮細胞；輸尿管上皮細胞；腎足細胞；內(nèi)皮祖細胞；輸卵管上皮細胞；乳腺上皮細胞
公司提供細胞系人源做過STR鑒定，其他做過種屬鑒定，確保產(chǎn)品無誤后方可提供客戶，形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時間；確保實驗順利。常用細胞系有：WB-F344細胞；RG2[D74]細胞；NRK細胞；A7r5細胞；L6細胞；UMNSAH/DF-1細胞；MDBK(NBL-1)細胞；MDBK細胞；CCC-SMC-1細胞；PtK1(NBL-3)細胞；Mv1Lu細胞；Mv.1.Lu(NBL-7)細胞；F81細胞；CRFK細胞；MLTC-1細胞；MS1細胞；C3H/10T1/2,Clone8細胞；GL261細胞；P3X63Ag8.653細胞；HCC38細胞；ZR-75-30細胞；SK-LU-1細胞；NCI-H2087細胞；SK-N-MC細胞；Hs895.T細胞
