紫外線(xiàn)和尼康DAPI-FITC-TRITC濾波器組合可見(jiàn)光透射光譜曲線(xiàn)下面示于圖1.該濾波器集合時(shí)在施加設(shè)計(jì)的DAPI，F(xiàn)ITC（異硫氰酸熒光素），和TRITC（四甲基異硫氰酸酯）探針的檢測(cè)組合，并采用一個(gè)激發(fā)濾光器與窄帶通窗中的紫外線(xiàn)（385至400納米），藍(lán)色（475?490納米），綠（545至565納米）的頻譜區(qū)。

三發(fā)射（阻擋）濾波器的帶通區(qū)域允許檢測(cè)的藍(lán)，綠，和橙紅色發(fā)射從最多同時(shí)3熒光染料。透射和反射帶的每一個(gè)過(guò)濾器，并應(yīng)用具有選擇為互補(bǔ)的發(fā)射和激發(fā)波長(zhǎng)的多個(gè)帶通透射區(qū)域一個(gè)二色鏡之間的尖銳過(guò)渡，使三頻帶信號(hào)檢測(cè)以最小的交叉，干擾和噪聲。

三重激發(fā)濾波器模塊DAPI-FITC-TRITC產(chǎn)品規(guī)格：

• 激發(fā)波長(zhǎng)篩選：385-400納米（帶通，393 CWL），475-490納米（帶通，483 CWL）和545-565納米（帶通，555 CWL）

• 二色鏡波長(zhǎng)：435-470納米（帶通），500-540毫微米（帶通），和570-645納米（帶通）

• 屏障過(guò)濾波長(zhǎng)：450-465納米（帶通，458 CWL），505-535納米（帶通，520 CWL）和580-620納米（帶通，600 CWL）

在DAPI-FITC-TRITC三重帶熒光濾波器組合被用于同時(shí)檢測(cè)所述熒光染料DAPI，F(xiàn)ITC和TRITC具有最小交叉的專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)（光譜泄放通）相鄰帶之間，并且它也可以與熒光的其它組合采用具有類(lèi)似的光譜曲線(xiàn)探針。 濾波器組的短波長(zhǎng)信號(hào)的信道將選擇狹義的光譜區(qū)為紫色激發(fā)和藍(lán)色發(fā)光檢測(cè); 第二，波長(zhǎng)較長(zhǎng)的信道對(duì)應(yīng)于藍(lán)色激發(fā)綠色發(fā)光檢測(cè)，以及綠色激發(fā)耦合到橙紅色發(fā)射構(gòu)成濾波器集合的第三頻帶。 短波長(zhǎng)激發(fā)傳輸?shù)拇笮?，以提供藍(lán)色發(fā)光的更好的平衡與其他熒光信號(hào)，同時(shí)也盡量減少漂白刻意降低。 研究從以下三組選擇熒光團(tuán)的各種組合時(shí)，此濾波器組建議：DAPI，藍(lán)色熒光蛋白（BFP）或Hoechst 染料（紫色激發(fā)）;FITC，綠色熒光蛋白（GFP），的Cy2，或Alexa Fluor 488（藍(lán)色激發(fā)）; TRITC，紅色熒光蛋白，Cy3的，將Alexa Fluor 546，或美圖跟蹤紅CMXRos（綠色激發(fā)）。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明該過(guò)濾器設(shè)置有多種針對(duì)不同細(xì)胞內(nèi)位置的熒光探針組合的性能。

圖2（a）所示的熒光發(fā)射從沾有MitoTracker紅CMXRos，將Alexa Fluor 488共軛鬼筆環(huán)肽和DAPI人骨肉瘤細(xì)胞（U-2線(xiàn)），其中針對(duì)細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體的網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白絲的文化，核上。 的可見(jiàn)光吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米，并且發(fā)射發(fā)生在599納米，而對(duì)于將Alexa Fluor 488的相應(yīng)的值是495和519納米。 注意在這四個(gè)子細(xì)胞，其清楚地表明通過(guò)高信號(hào)電平的所有三個(gè)用于染色的樣品中的熒光團(tuán)的存在顯著的對(duì)稱(chēng)性。

大鼠的皮膚組織的一個(gè)薄的部分染色DNA和糖蛋白用DAPI和四甲基羅丹明（TMR）綴合到小麥胚芽凝集素，分別示于圖2（b）。 紫外光吸收值的DAPI的是358納米，并且在可見(jiàn)光發(fā)射值發(fā)生在461納米，而對(duì)于TMR相應(yīng)值是550和573納米。 另外，將試樣同時(shí)標(biāo)記的Alexa Fluor 488綴合至鬼筆環(huán)肽（靶向肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò);綠色發(fā)光）。 注意兩個(gè)重疊和離散信號(hào)的來(lái)自所有三個(gè)這些熒光團(tuán)的存在。(奧林巴斯顯微鏡)

從牛肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)物被認(rèn)為免疫熒光標(biāo)記的同隨后山羊綴合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初級(jí)抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發(fā)射強(qiáng)度在圖2（c）所示。 將細(xì)胞培養(yǎng)物同時(shí)沾上德克薩斯紅鬼筆環(huán)肽和DAPI，靶向的細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)和DNA在細(xì)胞核中，分別。 可見(jiàn)光吸收的BODIPY FL的是505納米，并且發(fā)射發(fā)生在513納米，而對(duì)于德克薩斯紅的相應(yīng)值是595和620納米。

精選于圖2（d）是一個(gè)薄的小鼠腸沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍(lán)色熒光的凝集素特定于杯狀細(xì)胞的粘液部分。 另外，將試樣同時(shí)沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白; 600納米發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504納米激發(fā)和523納米發(fā)射）。 注意信號(hào)從藍(lán)色熒光團(tuán)（Alexa Fluor 350）的存在下，以及作為核在組織標(biāo)本由于SYTOX綠的明亮的綠色熒光，并且橙紅色熒光（Alexa Fluor 568）從肌動(dòng)蛋白絲在刷邊框。

沾有MitoTracker紅CMXRos和Alexa Fluor 488綴合鬼筆環(huán)肽正常人肺成纖維細(xì)胞（MRC-5線(xiàn)），其靶向細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體的網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞骨架的肌動(dòng)蛋白絲，分別示于圖2（e）所示。 另外，將試樣同時(shí)用DAPI染色（在細(xì)胞核靶向DNA;紫外線(xiàn)激發(fā)的藍(lán)色發(fā)光）。 注意相對(duì)平衡，高信號(hào)電平的所有三個(gè)用于染色的樣品中的熒光團(tuán)的存在。

由薄麥粒的截面自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度（ 小麥 ）的組織中演示了圖2（f）所示。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括木質(zhì)素，葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。 在藍(lán)色和綠色的激發(fā)區(qū)域，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個(gè)顯著量熒光在與450和550納米之間的波長(zhǎng)激發(fā)。 其他的內(nèi)源性熒光團(tuán)通過(guò)紫外線(xiàn)與該過(guò)濾器組合激發(fā)。 對(duì)于以上所示的麥粒組織，注意自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度中的藍(lán)，綠，和紅光譜區(qū)域的存在，這是尼康DAPI-FITC-TRITC熒光濾波器組合的特性。