Thermo Scientific Pierce 活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 GGA3 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測(cè) GTP 結(jié)合 Arf1 GTPase。
活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒包含純化的 GST-GGA3 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對(duì)照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Arf1 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 MDCK 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Arf1 活性。
活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Arf1 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對(duì) Arf1 檢測(cè)進(jìn)行功能檢測(cè)，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對(duì)小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Arf1 GTPase 活化
? 研究外殼蛋白組裝至出芽囊泡或反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)和內(nèi)體期間 Arf1 的活化
? 監(jiān)測(cè)使用生長因子刺激后的 Arf1 活性
? 監(jiān)測(cè)小分子抑制劑處理后的 Arf1 活性
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Arf1 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對(duì)于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的活化 Arf1 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Arf1，在存在內(nèi)源性 Arf1 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Arf1 進(jìn)入 GDP 結(jié)合狀態(tài)（非活化），無論 Arf1 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對(duì)試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結(jié)合型二抗（山羊抗兔 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31460）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測(cè)。試劑盒所含成分均足夠進(jìn)行 30 次沉降實(shí)驗(yàn)。
Arf1 背景：
ADP 核糖基化因子蛋白 1-6 (Arf) 是 Ras 小 GTPase 家族的成員。雖然在結(jié)構(gòu)上相似，但 Arf1-6 的細(xì)胞作用不同于其他 Arf 家族成員；其內(nèi)源性作用不是 ADP 核糖基化，而是調(diào)節(jié)異源三聚體 G 蛋白。Arf 蛋白可分為三類：I 類 — Arf 1-3；II 類 — Arf 4,5；III 類 — Arf6。I 類和 II 類 Arf 與反式高爾基體網(wǎng)絡(luò) (TGN) 相關(guān)，參與將效應(yīng)蛋白募集至高爾基體膜并形成囊泡。與其他 GTPase 不同，Arf GTPase 在氨基末端通過豆蔻?；揎椧员悴迦肽ぶ小II 類蛋白 Arf6 與質(zhì)膜相關(guān)，參與質(zhì)膜處的囊泡形成、囊泡再循環(huán)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)。
盡管 Arf GTPase 在所有細(xì)胞中均有表達(dá)，但 Arf1 是極豐富、極活躍和進(jìn)行表征的。Arf1 將其效應(yīng)子（包括外被體和網(wǎng)格蛋白適配體復(fù)合物 (AP)）募集至高爾基體，發(fā)生囊泡形成和出芽。募集后，Arf1 維持膜上的外殼蛋白，直至形成囊泡。然后，Arf1 與其效應(yīng)子相互作用，使得 Arf1 從膜中釋放和囊泡出芽。高爾基體局部含 γ耳 Arf (GGA) 效應(yīng)子結(jié)合蛋白包含氨基端 VHS 結(jié)構(gòu)域、GGA 同源結(jié)構(gòu)域 (GGAH)、富含的連接區(qū)和羧基-末端 γ-耳銜接蛋白同源結(jié)構(gòu)域 (AGEH)。VHS 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域相互作用（進(jìn)行受體分選）、GGAH 與活化 Arf 結(jié)合、富含的區(qū)域與網(wǎng)格蛋白相互作用以及 AGEH 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞溶質(zhì)蛋白相互作用。通過突變研究，已證明 GGAH 結(jié)構(gòu)域足以結(jié)合 GTP 結(jié)合型 Arf，并且 Arf1 可結(jié)合所有三種 GGA 效應(yīng)蛋白。GGA 蛋白與 TGN 和質(zhì)膜的關(guān)聯(lián)受 Arf 調(diào)節(jié)。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測(cè)定小 GTPase 的激活
活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒包含純化的 GST-GGA3 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對(duì)照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Arf1 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 MDCK 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Arf1 活性。
活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Arf1 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對(duì) Arf1 檢測(cè)進(jìn)行功能檢測(cè)，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對(duì)小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Arf1 GTPase 活化
? 研究外殼蛋白組裝至出芽囊泡或反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)和內(nèi)體期間 Arf1 的活化
? 監(jiān)測(cè)使用生長因子刺激后的 Arf1 活性
? 監(jiān)測(cè)小分子抑制劑處理后的 Arf1 活性
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Arf1 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對(duì)于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的活化 Arf1 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Arf1，在存在內(nèi)源性 Arf1 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Arf1 進(jìn)入 GDP 結(jié)合狀態(tài)（非活化），無論 Arf1 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對(duì)試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結(jié)合型二抗（山羊抗兔 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31460）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測(cè)。試劑盒所含成分均足夠進(jìn)行 30 次沉降實(shí)驗(yàn)。
Arf1 背景：
ADP 核糖基化因子蛋白 1-6 (Arf) 是 Ras 小 GTPase 家族的成員。雖然在結(jié)構(gòu)上相似，但 Arf1-6 的細(xì)胞作用不同于其他 Arf 家族成員；其內(nèi)源性作用不是 ADP 核糖基化，而是調(diào)節(jié)異源三聚體 G 蛋白。Arf 蛋白可分為三類：I 類 — Arf 1-3；II 類 — Arf 4,5；III 類 — Arf6。I 類和 II 類 Arf 與反式高爾基體網(wǎng)絡(luò) (TGN) 相關(guān)，參與將效應(yīng)蛋白募集至高爾基體膜并形成囊泡。與其他 GTPase 不同，Arf GTPase 在氨基末端通過豆蔻?；揎椧员悴迦肽ぶ小II 類蛋白 Arf6 與質(zhì)膜相關(guān)，參與質(zhì)膜處的囊泡形成、囊泡再循環(huán)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)。
盡管 Arf GTPase 在所有細(xì)胞中均有表達(dá)，但 Arf1 是極豐富、極活躍和進(jìn)行表征的。Arf1 將其效應(yīng)子（包括外被體和網(wǎng)格蛋白適配體復(fù)合物 (AP)）募集至高爾基體，發(fā)生囊泡形成和出芽。募集后，Arf1 維持膜上的外殼蛋白，直至形成囊泡。然后，Arf1 與其效應(yīng)子相互作用，使得 Arf1 從膜中釋放和囊泡出芽。高爾基體局部含 γ耳 Arf (GGA) 效應(yīng)子結(jié)合蛋白包含氨基端 VHS 結(jié)構(gòu)域、GGA 同源結(jié)構(gòu)域 (GGAH)、富含的連接區(qū)和羧基-末端 γ-耳銜接蛋白同源結(jié)構(gòu)域 (AGEH)。VHS 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域相互作用（進(jìn)行受體分選）、GGAH 與活化 Arf 結(jié)合、富含的區(qū)域與網(wǎng)格蛋白相互作用以及 AGEH 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞溶質(zhì)蛋白相互作用。通過突變研究，已證明 GGAH 結(jié)構(gòu)域足以結(jié)合 GTP 結(jié)合型 Arf，并且 Arf1 可結(jié)合所有三種 GGA 效應(yīng)蛋白。GGA 蛋白與 TGN 和質(zhì)膜的關(guān)聯(lián)受 Arf 調(diào)節(jié)。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測(cè)定小 GTPase 的激活
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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