? 以畢赤酵母中分泌性蛋白生產(chǎn)開(kāi)始。
? 通過(guò)營(yíng)養(yǎng)缺陷型和顏色選擇快速篩選畢赤酵母轉(zhuǎn)化體。
? 使用蛋白酶缺乏的畢赤酵母菌株減少蛋白降解。
PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒隨附:
? PichiaPink™ 分泌性蛋白載體試劑盒(貨號(hào) A11153)
? PichiaPink™ 表達(dá)菌株套件(貨號(hào) A11154)
? PichiaPink™ 培養(yǎng)基試劑盒(貨號(hào) A11156)
篩選畢赤酵母轉(zhuǎn)化體的新方法
PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒使用腺嘌呤營(yíng)養(yǎng)缺陷型來(lái)選擇畢赤酵母轉(zhuǎn)化體。PichiaPink™ 菌株具有 ade2 基因型,需要與 ADE2 基因互補(bǔ)才能在無(wú)腺嘌呤的情況下生長(zhǎng)。使用營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)志物還可以更容易地維持轉(zhuǎn)化體。無(wú)需使用抗生素來(lái)維持您的轉(zhuǎn)化體。
此外,您可以按顏色篩選畢赤酵母轉(zhuǎn)化體。未轉(zhuǎn)化的 PichiaPink™ 菌株表現(xiàn)為粉紅色菌落,而轉(zhuǎn)化的 PichiaPink™ 菌株表現(xiàn)為白色菌落(圖 1)。
使用 pPINKα-HC 載體分泌您的蛋白
PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒隨附 pPINKα-HC 載體。pPINKα-HC 載體具有內(nèi)置的 α-交配因子信號(hào)序列,可使您的蛋白分泌到培養(yǎng)基中。將您的蛋白質(zhì)分泌到培養(yǎng)基中可以更容易收獲和純化您的蛋白。pPINKα-HC 載體圍繞 ADE2 基因構(gòu)建,以補(bǔ)充 ade2 缺陷型畢赤酵母菌株。該載體使用甲醇誘導(dǎo)的 AOX1 啟動(dòng)子來(lái)表達(dá)您的蛋白。此外,pPINKα-HC 載體設(shè)計(jì)用于在畢赤酵母轉(zhuǎn)化體中以高拷貝數(shù)進(jìn)行整合。
PichiaPink ™ 分泌性蛋白載體試劑盒(貨號(hào) A11153)可單獨(dú)訂購(gòu)以補(bǔ)充 PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒。
使您的蛋白保持完整
PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒隨附 PichiaPink™ 表達(dá)菌株套件。該套件包含與 PichiaPink™ 酵母表達(dá)系統(tǒng)配合使用的 4 株畢赤酵母菌株。所有 4 株菌株均為 ade2 基因型。此外,3 株菌株包括 2 個(gè)蛋白酶基因的敲除。蛋白酶缺乏菌株可減少細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)對(duì)蛋白酶抑制劑的需求,并可提高蛋白產(chǎn)量。檢測(cè)單蛋白酶敲除或雙蛋白酶敲除,找出比較適合您的蛋白酶。
您可以單獨(dú)訂購(gòu) PichiaPink™ 表達(dá)菌株套件(貨號(hào) A11154)以補(bǔ)充 PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒。
袋裝培養(yǎng)基方便您開(kāi)始使用
PichiaPink™ 培養(yǎng)基試劑盒是一組方便的預(yù)包裝培養(yǎng)基袋,可與 PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒配合使用。PichiaPink™ 培養(yǎng)基試劑盒含有將 PichiaPink™ 菌株從冷凍儲(chǔ)備生長(zhǎng)至可進(jìn)行轉(zhuǎn)化和選擇的培養(yǎng)物所需的培養(yǎng)基。您可以單獨(dú)訂購(gòu) PichiaPink™ 培養(yǎng)基試劑盒(貨號(hào) A11156)以補(bǔ)充 PichiaPink™ 分泌性蛋白表達(dá)試劑盒。
為什么選擇 PichiaPink™ 酵母表達(dá)系統(tǒng)?
PichiaPink™ 酵母表達(dá)系統(tǒng)基于酵母菌畢赤酵母。畢赤酵母的優(yōu)點(diǎn)包括快速生長(zhǎng)、明確的遺傳背景、簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基配方和易于處理。30 多年來(lái),畢赤酵母已經(jīng)被實(shí)驗(yàn)室用于生產(chǎn)來(lái)自多個(gè)物種(包括人類(lèi))的數(shù)百種不同蛋白(參考文獻(xiàn) 1、2)。PichiaPink™ 酵母菌表達(dá)系統(tǒng)使您能夠以便利且具成本效益的方式實(shí)現(xiàn)從小規(guī)模到大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn)。
有關(guān)獲取 PichiaPink™ 酵母菌表達(dá)系統(tǒng)商業(yè)用途許可證的信息,請(qǐng)?jiān)L問(wèn)outlicensing。
僅供研究使用。不適用于任何動(dòng)物或人的治療或診斷。
相關(guān)鏈接
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參考文獻(xiàn)
1.Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66.[PubMed]
2.Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol.2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]