CloneJET PCR 克隆試劑盒

Thermo Scientific CloneJET PCR 克隆試劑盒也可用于 DH10B 細(xì)胞 (K123120)，是一款的陽(yáng)性選擇系統(tǒng)，可高效克隆由任何熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶生成的 PCR 產(chǎn)物。也可以克隆任何其他的鈍性或黏性末端DNA片段。其非常適用于磷酸化或非磷酸化DNA片段。只需 5 分鐘即可連接至所包含的陽(yáng)性分選載體，并產(chǎn)生超過(guò) 99% 的重組克隆。將由校正酶生成的平末端 PCR 產(chǎn)物直接接入克隆載體。

在連接前 5 分鐘內(nèi)使用試劑盒提供的熱穩(wěn)定 DNA 平末端化酶將由非校正 DNA 聚合酶或 DNA 聚合酶混合物生成的 PCR 產(chǎn)物處理成平末端。所有常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室大腸桿菌菌株都可以使用連接產(chǎn)物直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

特點(diǎn)

CloneJET PCR 克隆試劑盒中包含一種新的即用型陽(yáng)性選擇克隆載體 pJET1.2/blunt。該載體中有一個(gè)致命型限制性酶基因，此基因在 DNA 插入片段接入克隆位點(diǎn)后即被破壞。因此，只有含重組質(zhì)粒的細(xì)菌細(xì)胞才能形成菌落。不含插入片段的再循環(huán) pJET1.2/blunt 載體分子會(huì)表達(dá)致死性限制性內(nèi)切酶，繼而在轉(zhuǎn)化后殺死宿主大腸桿菌細(xì)胞。此陽(yáng)性選擇大大加快了菌落篩選的進(jìn)程，節(jié)省了藍(lán)白斑篩選所需的額外成本。

為了便于對(duì)插入片段進(jìn)行映射和處理，pJET1.2/blunt 克隆載體的多克隆位點(diǎn)包含兩個(gè) BglII 識(shí)別序列，位于插入位點(diǎn)兩側(cè)。此外，載體含有用于體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)錄以及插入片段測(cè)序的 T7 啟動(dòng)子。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

•快速—在僅 5 分鐘內(nèi)完成 PCR 克隆
•較高效率–>99% 陽(yáng)性克隆
•無(wú)克隆背景—陽(yáng)性選擇載體
•多用途—是平末端或黏性末端克隆的理想選擇
•經(jīng)濟(jì)—無(wú)需進(jìn)行昂貴的藍(lán)白斑篩選

應(yīng)用

•克隆高達(dá) 10 kb 的平末端或 '3-dA 尾 PCR 產(chǎn)物
•克隆限制性內(nèi)切酶生成的 DNA 片段
•克隆 DNA 測(cè)序
•從 T7 啟動(dòng)子體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)錄克隆插入片段

包括

•pJET1.2/blunt 克隆載體
• T4 DNA 連接酶
• 2X 反應(yīng)緩沖液
• DNA 平末端化酶
• pJET1.2 正向測(cè)序引物 (5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3')
• pJET1.2 反向測(cè)序引物 (5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3')
• 對(duì)照 PCR 產(chǎn)物
• 無(wú)核酸酶水
•詳細(xì)方案

電穿孔前，始終使用 GeneJET PCR 純化試劑盒 #K0701 對(duì)連接混合物進(jìn)行柱純化或使用氯仿進(jìn)行提取。混合物中存在蛋白質(zhì)和鹽分會(huì)抑制電穿孔。

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