pCR™4Blunt-TOPO™ 載體—針對測序進(jìn)行優(yōu)化
我們從 pCR™4Blunt-TOPO™ 載體中刪除了大量的多克隆位點(diǎn),以將測序引物位點(diǎn)與插入位點(diǎn)之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測序反應(yīng)具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4Blunt TOPO™ 載體具有 4 種常見測序引物的位點(diǎn):M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。
pCR™4Blunt-TOPO™ 克隆選擇和操作
pCR™4Blunt-TOPO™ 載體包含氨芐和抗性標(biāo)記物以及用于陽性選擇的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點(diǎn)仍包括用于克隆 PCR 產(chǎn)物簡化切除的旁側(cè) EcoRI 位點(diǎn)和用于在測序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點(diǎn)?!疶7 和 T3 啟動子也用于體外轉(zhuǎn)錄。
簡化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO 克隆技術(shù),無需使用含有特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時(shí)長的 DNA 操作步驟。™只需將 PCR 反應(yīng)物直接添加至提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶帶電載體中,孵育 5 分鐘,并使用提供的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達(dá) 95%,您可以篩選更少的克隆體,節(jié)省時(shí)間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4Blunt-TOPO™ 載體無突出端,用于高效連接由校正性耐熱聚合酶(可留下平末端 PCR 產(chǎn)物)產(chǎn)生的 PCR 產(chǎn)物。
克隆標(biāo)準(zhǔn)
在克隆方面,TOPO™ 克隆技術(shù)已作為一種可靠技術(shù)供成千上萬的科學(xué)家使用達(dá)十余年??焖佟⒑唵我子们腋咝У?TOPO™ 克隆已在多種應(yīng)用中應(yīng)用于多種不同載體。
測序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆試劑盒—試劑盒規(guī)格
根據(jù)您的需求,測序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆試劑盒可與可提供不同優(yōu)勢的多種感受態(tài)細(xì)胞一起購買:
• 一般克隆:0 細(xì)胞(貨號K2875-J10、K2875-20、K2875-40)
• 高效克?。? Electrocomp™ 細(xì)胞(貨號號 K2880-20、K2880-40)
• 一般克隆,噬菌體 T1 抗性:DH5α-T1R(貨K2895-20)
• 快速生長:Mach1™-T1R 化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌(貨號 K2835-20)
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