安捷倫液相色譜柱選擇指南
1.色譜柱的構造
色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成，壓力不高于70 kg/cm2 時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效，減小管壁效應，不銹鋼柱內壁多經過拋光。也有人在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料以提高內壁的光潔度，其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的，用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板，是燒結不銹鋼或鈦合金，孔徑0.2~20µm（5~10µm），取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。
2.色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類，尺寸規(guī)格也不同：
①常規(guī)分析柱（常量柱），內徑2~5mm（常用4.6mm，國內有4mm和5mm），柱長10~30cm；
②窄徑柱（narrow bore，又稱細管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內徑1~2mm，柱長10~20cm；
③毛細管柱（又稱微柱microcolumn），內徑0.2~0.5mm；
④半制備柱，內徑＞5mm；
⑤實驗室制備柱，內徑20~40mm，柱長10~30cm；
⑥生產制備柱內徑可達幾十厘米。柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應。
3.色譜柱的分類
常見的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18）、碳八柱（MOS/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、 碳四柱（Butyl/C4）、碳一柱（Methyl/C1）、陰離子交換柱（SAX）、 陽離子交換柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、 氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）
常見的吸附柱填料：硅膠柱
4.正相色譜柱與反相色譜柱的區(qū)別
色譜柱的安裝
1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線，同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前，確認流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱。 2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達的連接效果，應盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。 3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃。
流動相平衡：
1、在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配制以保持新鮮避免細菌產生。
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合后應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉淀。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動相需脫氣后使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區(qū)別，應該使用過度分布的形式進行平衡。避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。
樣品制備與操作：
1、樣品應當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
2、樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得分離效果，使用時請不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外操作溫度不要超過60℃。
保存色譜柱：
1、如果流動相含有酸或無機鹽，應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然后用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱。最后用柱子的接頭密封，并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。
2、應避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
用相當于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖。沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇。
5.色譜柱發(fā)展方向
因強調分析速度而發(fā)展出短柱，柱長3~10cm，填料粒徑2~3µm。為提高分析靈敏度，與質譜（MS）聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱、毛細管柱和內徑小于0.2mm的微徑柱（microbore）。細管徑柱的優(yōu)點是：①節(jié)省流動相；②靈敏度增加；③樣品量少；④能使用長柱達到高分離度；⑤容易控制柱溫；⑥易于實現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。
但由于柱體積越來越小，柱外效應的影響就更加顯著，需要更小池體積的檢測器（甚至采用柱上檢測），更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設備應具備如下性能：能精密輸出1~100µl/min的低流量，進樣閥能準確、重復地進樣微小體積的樣品。且因上樣量小，要求高靈敏度的檢測器，電化學檢測器和質譜儀在這方面具有突出優(yōu)點。
6.填充和性能評價
色譜柱的性能除了與固定相性能有關外，還與填充技術有關。在正常條件下，填料粒度＞20µm時，干法填充制備柱較為合適；顆粒＜20µm時，濕法填充較為理想。填充方法一般有4種：①高壓勻漿法，多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充；②徑向加壓法，Waters；③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；④干法。柱填充的技術性很強，大多數(shù)實驗室使用已填充好的商品柱。
必須指出，高效液相色譜柱的獲得，裝填技術是重要環(huán)節(jié)，但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結構是否合理。
無論是自己裝填的還是購買的色譜柱，使用前都要對其性能進行考察，使用期間或放置一段時間后也要重新檢查。柱性能指標包括在一定實驗條件下（樣品、流動相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復性，或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以內。進行柱效比較時，還要注意柱外效應是否有變化。
一份合格的色譜柱評價報告應給出柱的基本參數(shù)，如柱長、內徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對稱度和柱壓降等。
7.使用和維護注意事項
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
②應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/span>
③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
⑤避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
⑥經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質，在甲醇（乙腈）沖洗時重復注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。
⑦保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料，只能在pH2~9范圍內使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用，應每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
安捷倫公司簡介
安捷倫科技有限公司是一家多元化的高科技跨國公司，它于1999年從惠普研發(fā)有限合伙公司分離出來，主要致力于通訊和生命科學兩個領域內產品的研制開發(fā)、生產銷售和技術服務等工作。
安捷倫科技有限公司是分析儀器系統(tǒng)的供應商，其產品正在化學、環(huán)保、食品、醫(yī)藥和生命科學領域中廣泛使用。安捷倫具有*的化學分析儀器，豐富的法規(guī)適應性和專業(yè)技術經驗，以及優(yōu)良的支持服務系統(tǒng)，這些都能夠幫助您的實驗室超前應對分析的挑戰(zhàn)。
創(chuàng)始人 威廉·休利特和戴維·帕卡德
年凈收入 51億美元（？年）
員工人數(shù) 20,000（？年）
總裁兼執(zhí)行官 邵律文[William P. （Bill） Sullivan]
總部所在地 美國加利福尼亞州 Santa Clara
電子測量
安捷倫的電子測量業(yè)務為客戶提供量身定制的、標準的電子電子測量儀器和系統(tǒng)，通信網絡和服務的監(jiān)測、管理和優(yōu)化工具，以及用于電子設備和通信網絡和服務設計、開發(fā)、制造、安裝、部署和運營方面的軟件設計工具和相關服務。截至2005年10月31日，我們在電子測量業(yè)務領域的員工約為11,500。
市場：安捷倫的電子測量業(yè)務所涉及的市場包括通信測試和綜合測試。
產品領域：通信測試產品包括為下列類型的網絡和系統(tǒng)提供的產品：光線網絡、傳輸網絡、寬帶和數(shù)據網絡、無線通信和微波網絡。安捷倫還對安裝、維護和運營支持系統(tǒng)提供幫助。綜合測試產品包括綜合儀器、模塊儀器和測試軟件、數(shù)字設計產品、參數(shù)測試產品、高頻電子設計工具、電子制造測試設備和薄膜電晶體陣列測試設備。
生物分析測量
安捷倫的生物分析測量業(yè)務提供以應用為中心的解決方案，其中包括能夠讓用戶識別、量化和分析物質和產品的物理和化學屬性的儀器、軟件、耗材和服務。截至2005年10月31日，我們在生物分析測量業(yè)務領域的員工約為4,000名。
市場：生物分析測量業(yè)務所涉及的市場包括生命科學，其中包括藥物分析、基因表達和蛋白質組市場，以及化學分析，其中包括石化、環(huán)保、國土安全、法醫(yī)、生物農業(yè)以及食品安全市場。
產品領域：生物分析測量業(yè)務的七大主要產品包括：微陣列、微流體、氣相色譜、液相色譜、質譜、軟件和信息學、以及相關耗材、試劑和服務。
安捷倫實驗室
安捷倫實驗室是安捷倫的中心研究機構，總部位于美國加利福尼亞州Santa Clara，并在中國北京、美國華盛頓州Everett、比利時Leuven、以及英國蘇格蘭South Queensferry設有分支機構。安捷倫實驗室主要致力于從事兩大類型的研究：
1）針對能夠轉化為我們在通信、電子、生命科學和化學分析領域的現(xiàn)有業(yè)務的技術而進行的應用型研究
2）針對創(chuàng)造在我們目前的市場之外，但屬于我們所關心領域的新業(yè)務而進行的研究。安捷倫實驗室同時也提供跨公司各個部門的技術整合。
安捷倫銷售和支持
主要通過直銷的方式銷售產品，但也同時通過分銷商、轉銷商、制造商代表、電話銷售和電子商務的方式進行銷售。
安捷倫液相色譜柱的優(yōu)勢
作為大的測試測量公司，為您提供的不僅僅是基本產品， 更有重現(xiàn)的結果
無論是研究工作還是常規(guī)的QA/QC檢測，安捷倫都有一種ZORBAX HPLC柱為您提供解決方案，幫助您更好地進行特定的檢測和純化應用。 安捷倫的ZORBAX色譜柱品種繁多，包括 Rapid Resolution HT （1.8 µm） 和Rapid Resolution （3.5 µm） ，于高通量分析。 有適用于蛋白組學分離的色譜柱，也有適用于放大純化規(guī)模的色譜柱，共有800多種選擇，覆蓋了各種應用范圍和條件，能夠滿足各類分析應用的需求。
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