包裝規(guī)格
產(chǎn)品號(hào) | 品牌 | 包裝規(guī)格 |
200110-10 | shengyou | 10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無(wú)菌。 |
200110-50 | shengyou | 50mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無(wú)菌。 |
產(chǎn)品說(shuō)明
杭州欣友生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通過(guò) Birkedal-Hansen1 的方法,通過(guò)醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。
shengyou鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。
shengyou鼠尾膠原蛋白包被的
培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的 PC-12 細(xì)胞
shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠中
生長(zhǎng)的 NIH-3T3 細(xì)胞(接種后 5天)
和Sigma鼠尾膠原蛋白(cat# C7661)
SDS-PAGE 電泳對(duì)比。
A: Sigma B:shengyou
使用方法
1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2
以包被濃度為 2 ug/cm2 為例:
用無(wú)菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中:
表面積(cm2 ,每孔或每皿) | 加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul ) | |
96孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 0.3 | 50 |
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 1.9 | 300 |
12孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 3.8 | 600 |
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板 | 9.5 | 1580 |
35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 8 | 1330 |
60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 21 | 3500 |
100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿 | 55 | 9170 |
確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后,用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。
2、三維膠原的制備
shengyou鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。
需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水
A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。
B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注:鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。
1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.