Bradford Protein Assay Kit
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
BL524A | Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | 250 ml/1000T |
產(chǎn)品簡介:
本公司生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測定試劑盒是根據(jù)目前廣泛應用的蛋白濃度檢測方法之一Bradford法研制而成。其操作簡單,靈敏度高,檢測速度極快。可檢測濃度下限達25ug/ml的蛋白樣品,最小檢測蛋白量達到0.5ug,待測樣品體積為1-20ul。
本產(chǎn)品主要成分為考馬斯亮藍G250。
產(chǎn)品組分:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
BL524A-1 | 考馬斯亮藍G250溶液 | 250ml |
BL524A-2 | 蛋白標準(BSA) | 25mg |
BL524A-3 | 蛋白標準配制液 | 1.5ml |
使用方法:
1、 取1ml蛋白標準配置液加入到25mgBSA的蛋白標準管中,*溶解蛋白標準品,即為25mg/ml的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液可-20℃長期保存。
2、 取適量25mg/ml蛋白標準溶液,稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標準品*好與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見,通常使用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。
3、 做標準曲線。將標準品按0,1,2,4,8,12,16,20ul加到96孔板中,不足20ul的加標準品稀釋液補足到20ul。
4、 將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度,加到96孔板中,使待測樣品總體積也為20ul。
5、 每孔加入考馬斯亮藍G250溶液200ul,充分混勻(可將酶標板放在振蕩器上振蕩30s),室溫放置3-5min后,以標準曲線0號做參比,在 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。以標準品蛋白含量(ug)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線。
6、 如用分光光度計測定,請在第三步的時候?qū)藴势敷w積改為1ml,濃度梯度用生理鹽水稀釋為0,1,2,5,10,15,30ug/ml?;蚋鶕?jù)樣品調(diào)整濃度梯度。
7、將樣品稀釋至合適濃度,加到小試管中,使待測樣品總體積也為1ml。
8、 每只試管加考馬斯亮藍G250溶液3ml,充分混勻,室溫放置3-5min后,以標準曲線0號做參比,在 595nm波長下比色測定,記錄各孔吸光度值。
注意事項:
1、 考馬斯亮藍G250溶液使用前請顛倒3-5次,混勻。
2、 蛋白標準請在全部溶解后先混勻,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標準。
3、 將考馬斯亮藍G250溶液回復到室溫再使用,有利于提高檢測的靈敏。
4、 Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20,60,80低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒(BL521A)。染色時間不能太長,否則活細胞會因染料積累而染成顏色,使檢測結果偏低。
5、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件:
考馬斯亮藍G250溶液室溫保存,配置好的蛋白標準液-20℃凍存。效期一年。