一、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 人B淋巴母細胞 |
細胞別稱 | HMy2.CIR; Hmy.2 CIR; HMy2.CIR; C1R |
細胞貨號 | SNL-011 |
細胞種屬 | 人 |
生長情況 | 懸浮 |
培養(yǎng)條件 | IMDM+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1. 混勻細胞,收集細胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清; 2. 加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 3. 補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 部分懸浮細胞會附著瓶底,輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1. 離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管; 3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
Tips:
1. 細胞懸浮生長,形態(tài)各異,偶有小聚團,部分細胞附著瓶底;
2. 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞,如果無法判斷,可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數(shù)確定細胞活率;
3. 懸浮細胞密度維持1E5-5E5/ml之間,密度過低或者過高可能會影響細胞狀態(tài);
我們tui薦使用尚恩生物HMy2.CIR(人B淋巴母細胞)zuan用*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:SNLM-011)作為體外培養(yǎng)HMy2.CIR(人B淋巴母細胞)的培養(yǎng)基。