| 一、細胞基本屬性 | |
| 細胞名稱 | 人B淋巴母細胞 |
| 細胞別稱 | HMy2.CIR; Hmy.2 CIR; HMy2.CIR; C1R |
| 細胞貨號 | SNL-011 |
| 細胞種屬 | 人 |
| 生長情況 | 懸浮 |
| 培養(yǎng)條件 | IMDM+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1. 混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清； 2. 加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 3. 補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項 | 部分懸浮細胞會附著瓶底，輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
| 三、細胞凍存操作 | |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手tui薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1. 離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞； 2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管； 3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 |
Tips：
1. 細胞懸浮生長，形態(tài)各異，偶有小聚團，部分細胞附著瓶底；
2. 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數(shù)確定細胞活率；
3. 懸浮細胞密度維持1E5-5E5/ml之間，密度過低或者過高可能會影響細胞狀態(tài)；
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