一、細胞基本屬性 | |
細胞名稱 | 小鼠骨髓瘤細胞 |
細胞別稱 | P3/ag; P3; ag; P3-ag |
細胞貨號 | SNL-145 |
細胞種屬 | 小鼠 |
生長情況 | 半貼壁 |
培養(yǎng)條件 | IMDM+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.輕輕吸走培養(yǎng)上清,留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞; 2.混勻細胞,收集細胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清; 3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 4.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 半貼壁細胞會附著瓶底,但貼壁不緊,輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。 |
三、細胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞; 2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管; 3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案 |
Tips:
1.細胞半貼壁圓形生長,部分懸浮圓形,傳代時均可收集培養(yǎng),換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶,若貼壁細胞較多活性較好時可以不要懸浮的細胞;
2.傳代有部分細胞碎片可以換液后用PBS潤洗細胞清除,使用的PBS需要恢復到室溫,加入時不要沖到細胞面,潤洗盡量輕柔;
3.該細胞生長較快,培養(yǎng)基消耗較快,培養(yǎng)時注意密切關注細胞狀態(tài),密度較高、培養(yǎng)基有變黃趨勢時及時換液避免細胞狀態(tài)變差;
我們*使用尚恩生物P3/ag(小鼠骨髓瘤細胞)**培養(yǎng)基(產品貨號:SNLM-145)作為體外培養(yǎng)P3/ag(小鼠骨髓瘤細胞)的培養(yǎng)基。