一、細(xì)胞基本屬性 | |
細(xì)胞名稱 | 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞 |
細(xì)胞別稱 | NK-92MI; NK-92 M; NK-92 mi; NK92-MI; NK92Ml; NK-92 transfected with MFG-Hil2 |
細(xì)胞貨號 | SNL-195 |
細(xì)胞種屬 | 人 |
生長情況 | 懸浮 |
培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清; 2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 3.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項(xiàng) | 部分懸浮細(xì)胞會附著瓶底,輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細(xì)胞操作,吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
三、細(xì)胞凍存操作 | |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手*)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手*); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞; 2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管; 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
Tips:
1.細(xì)胞增殖偏慢,均為懸浮生長,大部分細(xì)胞聚集成團(tuán),少數(shù)分散的細(xì)胞,并且細(xì)胞間隙會有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。
2.強(qiáng)烈建議選擇尚恩生物NK92-MI*培養(yǎng)基(貨號SNLM-195)培養(yǎng)。
我們*使用尚恩生物NK-92MI(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞)**培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:SNLM-195)作為體外培養(yǎng)NK-92MI(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者NK細(xì)胞)的培養(yǎng)基。